Microbiología I

PRUEBAS DIAGNÓSTICAS INMUNOLÓGICAS

Introducción: 

Un antígeno reacciona sólo con el anticuerpo que desencadenó su producción o por un antígeno con relación estrecha, por esta alta especificidad, las reacciones entre un antígeno y un anticuerpo pueden utilizarse para identificar la presencia de uno por medio de otro.

Los microorganismos y otras células poseen diversos antígenos y por tanto pueden reaccionar con varios anticuerpos diferentes.

Los anticuerpos monoclonales son herramientas excelentes para la identificación de antígenos porque tienen una especificidad conocida y son homogéneos

• Enzimoinmunoanálisis de adsorción (ELISA): 

• Para medir los anticuerpos, se fijan antígenos conocidos a un fase sólida, se incuban con diluciones del anticuerpo estudiado, se lavan y se vuelven a incubar con anticuerpos marcados contra la inmunoglobulina con una enzima. 
• La actividad enzimática se mide al añadir un sustrato específico y se valora la reacción de color, que se encuentra en relación directa con la cantidad de anticuerpo unido.
• Este tipo de análisis se utiliza, por ejemplo, para la detección de anticuerpos contra proteínas de VIH en muestras de sangre.

• Inmunofluorescencia:
• Los colorantes fluorescentes pueden unirse en forma covalente con las moléculas de anticuerpo y se hacen visibles mediante el uso de luz ultravioleta en un microscopio de fluorescencia. 
• Tales anticuerpos marcados pueden utilizarse para identificar antígenos o en células en cortes histológicos o en otras muestras.
• Una reacción de inmunofluorescencia directa ocurre cuando un anticuerpo marcado conocido interactúa directamente con un antígeno desconocido.
• Una reacción de inmunofluorescencia indirecta ocurre cuando se utiliza un proceso de dos etapas, por ejemplo, un antígeno conocido se fija a una laminilla y se añade suero desconocido y se realiza lavado de la preparación.

• Inmunotransferencia:

• Es un método que identifica antígenos particulares en una mezcla compleja de proteínas, este método separa las proteínas con base en el tamaño sódico
• Esta mezcla se somete a electroforesis en gel de poliacrilamida-dodecilsulfato sódico (SDS-PAGE), el gel se cubre con una membrana (a menudo una hoja de nitrocelulosa) y las proteínas se “transfieren” por electroforesis a la membrana, durante la transferencia, el dodecilsulfato sódico se elimina en gran medida de las proteínas y, al menos para unas cuantas proteínas, hay un plegamiento y su forma se restablece lo suficiente, de manera que los anticuerpos pueden reaccionar con las proteínas presentes en la membrana
• La proteína antigénica se hace visible en forma de una banda sobre la membrana
• No se detecta ninguna de las proteínas restantes en la mezcla
• Esta técnica se utiliza, por ejemplo, para confirmar una prueba de ELISA positiva para VIH al demostrar la presencia de anticuerpos contra proteínas específicas de VIH en el suero de un paciente






Bibliografia
Jawetz. Microbiología Médica. Ed 25.